بررسی عفونت ریوی مایكوپلاسمایی ناشی از مایكوپلاسما مایكوئیدس واریته مایكوئیدس و مایكوپلاسما كاپری كولوم واریته كاپری كولوم در گوساله‌ها و بزهای كشتارشده به روش PCR
فهرست
عنوان..................................................................................................................................... صفحه
الف- مقدمه.......................................................................................................................... 1
ب-چکیده 3
فصل اول:کلیات .................................................................................................................. 5
1- تاریخچه ..................................................................................................................... 6
2- خصوصیات کلی مایکوپلاسما...................................................................................... 6
3- مقاومت مایکوپلاسماها............................................................................................... 8
4- طبقه بندی مایکوپلاسماها.......................................................................................... 9
5- طبقه بندی کلاستر مایکوئیدس.................................................................................. 12
6- فیلوژنی........................................................................................................................... 14
7- ساختمان .................................................................................................................... 15
1-7-ساختمان مایکوپلاسما مایکوئیدس ........................................................................... 15
2-7- ساختمان مایکوپلاسما کاپری کولوم .................................................................... 17
8- بیولوژی مولکولی...................................................................................................... 19
9- توالی‌های تکراری....................................................................................................... 23
10- پروتئینهای سطحی................................................................................................... 25
11- فاکتور حدت............................................................................................................... 30
12- آنالیز پروتئین ........................................................................................................ 32
13- طبقه بندی سویه‌ها .................................................................................................. 34
14- مشخصات گونه مایکوئیدس.................................................................................... 35
15- کشت و رشد گونه مایکوئیدس ............................................................................... 38
16- کشت و رشد گونه کاپری کولوم ............................................................................. 41
1-16- محیط Thiacourt ............................................................................................. 41
17- بیماری پلوروپنومونی واگیر گاوان....................................................................... 44
1-17- علائم بالینی ......................................................................................................... 45
2-17- علائم کالبدگشایی بیماری .................................................................................. 47
3-17- پاتوژنز ................................................................................................................ 50
1-3-17- مکانیسمهای مقابله با دستگاه ایمنی............................................................... 53
4-17- اختصاصیت میزبان.............................................................................................. 57
5-17- انتقال بیماری ...................................................................................................... 58
6-17- سیر همه گیری ...................................................................................................... 59
فهرست
عنوان ......... صفحه
1-6-17- مخزن................................................................................................................. 59
2-6-17- راه انتقال.......................................................................................................... 59
7-17- پیشگیری و کنترل................................................................................................ 60
1-7-17- اقدامات لازم برای حفاظت مناطق عاری از بیماری......................................... 61
2-7-17- اقدامات لازم هنگام شیوع بیماری................................................................... 62
3-7-17- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومی................................................................ 63
18- بیماری پلوروپنومونی واگیر بزان ........................................................................ 63
1-18- علائم بالینی ......................................................................................................... 64
2-18- علائم کالبد گشایی................................................................................................ 66
19- گونه مایکوپلاسما کاپریکولوم کاپریکولوم............................................................ 69
1-19- سندروم MASKePs........................................................................................... 70
2-19- علائم بالینی.......................................................................................................... 71
3-19- علائم کالبد گشایی................................................................................................ 71
4-19- سندروم آگالاکتیه واگیر...................................................................................... 73
20- گونه مایکوپلاسما کاپری ......................................................................................... 73
1-20- ........................................................................................................... 73
2-20- علائم کالبد گشایی................................................................................................ 74
21- سیر همه‌گیری........................................................................................................ 75
1-21-مخزن.......................................................................................................................... 75
2-21-راه انتقال............................................................................................................. 76
3-21-جمعیت میزبان.................................................................................................... 77
22-پیشگیری وکنترل .................................................................................................. 77
1-22- اقدامات لازم برای محافظت مناطق عاری از بیماری........................................ 77
2-22- اقدامات لازم هنگام شیوع بیماری.................................................................... 78
3-22- اقدامات لازم در مناطق آلوده بومی.................................................................. 78
23-واکسن ..................................................................................................................... 79
1-23-واکسن MmmLC ............................................................................................ 79
2-23-واکسن Mccp .................................................................................................... 79
3-23-واکسن Mcc ...................................................................................................... 79 79-اختصاصیت میزبان در کلاستر مایکوئیدس .................. ............................................................................ 80
فهرست
عنوان..................................................................................................................................... صفحه
25-تشخیص افتراقی..................................................................................................... 80
1-25-شناسایی عامل بیماری زا ........................................................................................ 81
1-1-25-بررسی میکروسکوپیک اگزودای ریه از طریق تهیه اسمیر یا برش بافتی. 81
2-25- تشخیص آزمایشگاهی ...................................................................................... 81
1-2-25- روش کشت و جداسازی............................................................................... 81
1-1-2-25- انتخاب نمونه ها ............................................................................................. 82
2-1-2-25- آماده سازی نمونه ها .............................................................................. 82
3-25- تستهای بیوشیمی............................................................................................. 83
4-25- روشهای سرولوژی........................................................................................... 85
1-4-25- عوامل موثر در آزمایشات سرولوژی ............................................................... 85
2-4-25- تست مهاری رشد ............................................................................................... 87
3-4-25- تست ایمونو فلورسانس .................................................................................... 88
4-4-25- تست رسوب ژلی................................................................................................. 88
5-4-25- تست فیکساسیون کامپلمان ................................................................................ 89
6-4-25- تست ممانعت از هماگلوتیناسیون ..................................................................... 89
7-4-25- تست آگلوتیناسیون لاتکس......................................................................... 90
8-4-25- تست الیزای رقابتی...................................................................................... 91
9-4-25- سایر تستهای تشخیصی.............................................................................. 94
5-25 - مشکلات روشهای سنتی................................................................................... 94
6-25- تشخیص با استفاده از PCR............................................................................ 95
فصل دوم: روش کار
26- روش کار ............................................................................................................... 101
1-26- جمع آوری نمونه ..................................................................................................... 101
1-1-26- مواد لازم............................................................................................................... 101
2-1-26- بخش جمع آوری نمونه................................................................................ 101
3-1-26- نمونه برداری ............................................................................................... 103
2-26- کشت و جداسازی نمونه ها............................................................................... 104
1-2-26- مواد لازم ....................................................................................................... 104
فهرست
عنوان..................................................................................................................................... صفحه
2-2-26- طرز تهیه محیط کشت اختصاصی برای جداسازی مایکوپلاسمای نشخوار کنندگان 106
1-2-2-26- مواد لازم .................................................................................................. 106
2-2-2-26- روش تهیه محیط کشت................................................................................... 107
3-26- استخراج DNA مایکوپلاسما............................................................................ 109
1-3-26- روش استخراج DNA از نمونه های ارسالی..................................................... 109
4-26- فرایند PCR ...................................................................................................... 110
1-4-26- مواد لازم ....................................................................................................... 110
2-4-26- آماده سازی مواد جهت واکنش PCR ................................................................ 112
1-2-4-26- افزوده سازی DNA نمونه‌ها ................................................................. 112
2-2-4-26- افزوده سازی DNA کلونیهای جدا شده................................................. 115
3-2-4-26- تهیه مخلوط اصلی اولیه.......................................................................... 115
3-4-26- پرایمرها......................................................................................................... 115
4-26- واکنش PCR..................................................................................................... 117
5-26- تهیه ژل الکتروفورز ......................................................................................... 118
1-5-26- طرز تهیه محلول اتیدیوم برماید ........................................................................ 119
6-26- الکتروفورز .............................................................................................................. 121
7-26- رویت باندهای ایجاد شده ................................................................................ 122
فصل سوم: نتایج
27- نتایج ..................................................................................................................... 124
1-27- جداسازی............................................................................................................ 124
1-1-27- بررسی عملکرد محیط کشت........................................................................ 124
2-1-27- نتایج کشت نمونه های ارسالی .................................................................. 124
1-2-1-27- نتایج روز پنجم ...................................................................................... 125
2-2-1-27- نتایج روزهفتم تا دهم............................................................................. 125
3-2-1-27- نتایج روزپانزدهم................................................................................... 126
2-27- نتایج PCR ........................................................................................................... 126
1-2-27- نتایج PCR نمونه ها با پرایمر جنس ....................................................... 126
2-2-27- تائید کلونی های جدا شده............................................................................ 127
3-2-27- نتایج PCR نمونه ها با پرایمر کلاستر مایکوئیدس................................ 127
4-2-27- نتایج PCR نمونه ها با پرایمر گونه آگالاکتیه......................................... 128
5-2-27- نتایج PCR نمونه ها با پرایمر گونه مایکوئیدس کلونی بزرگ..................... 129
3-27- نتایج کالبد گشایی............................................................................................ 130
1-3-27- معیار انتخاب ................................................................................................ 130
فهرست
عنوان ......... صفحه
فصل چهارم: بررسی نتایج
نمودارها ..................................................................................................................... 131
فصل پنجم: بحث
28- بحث ..................................................................................................................... 139
1-28- ضایعات کالبد گشایی............................................................................................... 139
2-28- میزان وقوع عفونت تنفسی مایکوپلاسما ........................................................ 141
3-28- روش کشت........................................................................................................ 142
4-28- روش PCR .................................................................................................... 147
5-28- فراوانی گونه ها ................................................................................................ 152
29- خلاصه انگلیسی..................................................................................................... 159
30- منابع ..................................................................................................................... 160
فهرست تصاویر
عنوان.......................................................................................................................... صفحه
تصویر شماره 1: کلونی تخم مرغی شکل مایکوپلاسما پس از سومین ساب کالچر 125
تصویر شماره 2: آزمایش PCR برای تشخیص جنس مایکوپلاسما در نمونه ریه 127
تصویر شماره 3: آزمایش PCR برای تشخیص کلاستر مایکوئیدس در نمونه ریه 128
تصویر شماره 4: آزمایش PCR برای تشخیص گونه آگالاکتیه درنمونه ریه..... ................................................................................................................. ................................................................................................................. ................................................................................................................. ................................................................................................................. 129
تصویر شماره 5: آزمایش PCR برای تشخیص گونه مایکوئیدس مایکوئیدس کلونی بزرگ 130
فهرست جداول
عنوان.......................................................................................................................... صفحه
جدول1: طبقه بندی مایکوپلاسما......................................................................................... 11
جدول 2: معرفی اعضا کلاستر مایکوئیدس و خصوصیات بیماریزایی آنها ............ 11
جدول 3: احتیاجات غذایی برای رشد مایکوپلاسماهای کلاستر مایکوئیدس............. 39
جدول 4 : مقادیر موردنیاز جهت تهیه مخلوط اصلی اولیه.......................................... 112
جدول 5: مواد مورد نیاز واکنش تکثیر ....................................................................... 114
جدول6 : پرایمرهای استفاده شده در واکنش تکثیر ................................................... 116
جدول 7 : برنامه واکنش پرایمرها ............................................................................... 118
جدول8: : فرمول تهیه محیط TBE(5X)..................................................................... 120
جدول9: میزان اتیدیوم بروماید مصرفی جهت ساختن مقادیر متفاوت ژل ................ 120
فهرست نمودارها
عنوان .................................................................................................................................... صفحه
نمودار شماره 1: درصد مایکوپلاسمای جدا شده به روش کشت در عفونت تنفسی
گله‌های مورد مطالعه................................................................................................. 132
نمودارشماره 2: درصد حضور مایکوپلاسما درعفونت تنفسی گله‌های مورد
مطالعه به روشPCR ............................................................................................. 132
نمودار شماره3 : مقایسه روشهای کشت و PCR در تشخیص مایکوپلاسما ی موجود در عفونت تنفسی گله‌های مورد مطالعه.............................................................................................................. 133
نمودار شماره4: مقایسه نتایج کشت وPCR نمونه‌ها در گله‌های مورد مطالعه (n=100) 133
نمودار شماره 5: مقایسه نتایج کشت و PCR مایکوپلاسما در گاو (n=50) ...... 134
نمودار شماره 6: مقایسه نتایج کشت و PCR مایکوپلاسما در گله های گوسفند (n=30) 134
نمودار شماره 7: مقایسه نتایج کشت و PCR در گله‌های بز (n=20).................. 135
نمودار شماره8: نمودار شماره 8:مقایسه نتایج تشکیل کدورت در محیط براث و PCR مایکوپلاسما در گله‌های مورد مطالعه (n=100) ............................................................................................ 135
نمودار شماره 9: نمودار شماره9:مقایسه نتایج ایجاد کدورت در محیط براث و جداسازی مایکوپلاسما در گله‌های مورد مطالعه (n=100) ............................................................................... 136
نمودار شماره 10: نمودار شماره10: مقایسه نتایج تشکیل کدورت در محیط براث و PCR مایکوپلاسما
در گله‌های گاو(n=50).............................................................................................. 136
نمودار شماره 11: نمودار شماره 11:مقایسه نتایج تشکیل کدورت در محیط براث و PCR مایکوپلاسما
در گله‌های بز (n=20)............................................................................................... 137
نمودار شماره12: مقایسه نتایج تشکیل کدورت در محیط براث و PCR مایکوپلاسما در گله‌های گوسفند (n=30) ................................................................................................................... 137
مقدمه
عفونت پلوروپنومونی واگیر، بیماری تحلیل برنده تنفسی است كه با جای گرفتن در طبقه‌بندی بیماریهای سازمان جهانی كنترل بیماریهای واگیر، لزوم و اهمیت شناسایی آن مشخص شده است. عامل اصلی این بیماری، گونه مایكوپلاسما مایكوئیدس می‌باشد كه تایپ كلونی كوچك آن[1] بطور اختصاصی به گله‌های گاو، خسارات فراوانی ناشی از همه‌گیری گسترده و مرگ و میر فراوان تحمیل كرده است.
تایپ كلونی بزرگ این گونه[2] همراه با دو گونه دیگر بنامهای مایكوپلاسما كاپری كولوم كاپری كولوم[3] و مایكوپلاسما مایكوئیدس كاپری[4] فرم غیركلاسیك پلوروپنومونی واگیر را در گله‌های گوسفند و بز بوجود آورده‌اند. این بیماری در فرم كلاسیك، که عامل آن مایکوپلاسما کاپری کولوم کاپری پنومونی[5] شناخته می‌شود، خسارات اقتصادی سهمگینی در گله‌های بز و گوسفند موجب گردیده است.
از آنجائیكه منطقه خاورمیانه جزو مناطق مشكوك به آلودگی پلوروپنومونی واگیر محسوب می‌شود، حفظ وضعیت عاری بودن از عفونت در این منطقه، مشكل یا تقریبا غیرممكن بوده و نیازمند بازنگری درراهبردهای بكار رفته به منظور تشخیص و كنترل این عفونت‌هاست. عدم برخورداری از خصوصیت پاتوگونومیك تشخیصی و پاتولوژیكی، مسیر بیماریزایی ناشناخته و تنوع فنوتیپی بسیار پیچیده ارگانیسم در مواجهه با دستگاه ایمنی میزبان، بر مشكل شناسایی آن افزوده است. علاوه بر این ، ابقا طولانی مدت باکتری در محل عفونت و وجود ناقلین بدون علامت، برنامه كنترل بیماری را با چالش روبرو كرده است.
از این رو، شناسایی و بكارگیری روشهای تشخیصی و تفریقی گونه‌های كلاستر مایكوپلاسما مایكوئیدس كه هركدام استراتژی جداگانه ای در برخورد با عفونت گله‌ها دارند، از اهمیت ویژه‌ای برخوردار است.
از آنجایی كه مایكوپلاسماهای پاتوژن در محیط كشت به سختی رشد می‌كنند، استفاده متداول از روش كشت و جداسازی، شناسایی عفونت گله‌ها را با مشكل روبرو كرده است.
از طرف دیگر، عمدتا به دلیل تشابه آنتی ژنتیكی بین گونه‌های كلاستر مایكوئیدس و سایر گونه‌های مایكوپلاسما، روشهای سرولوژی از دقت و ویژگی كافی در تمایز گونه‌ها برخوردار نیستند. لذا به رهیافت روشهای مولكولی مانندPCR بعنوان روشی سریع، دقیق و با حساسیت و ویژگی مطلوب در كنترل عفونت گله‌ها، توجه ویژه‌ای می‌شود.
هدف از این مطالعه، بررسی عفونتهای تنفسی ناشی از كلاستر مایكوئیدس در گله‌های نشخواركنندگان از طریق كشت و PCR می‌باشد.
چكیده :
كلاستر مایكوپلاسما مایكوئیدس در برگیرنده مهمترین پاتوژنهای تنفسی نشخواركنندگان است كه سالیانه، خسارات اقتصادی سنگینی بر صنعت دامپروری كشورهای جهان وارد می‌كند. اخیرا شیوعهای بازپدیدی از عفونتهای پلوروپنومونی نشخواركنندگان در منطقه خاورمیانه گزارش شده است. در این شرایط تعیین وضعیت گله‌های كشور از نظر آلودگی به گونه‌های پاتوژن این كلاستر، از اهمیت خاصی برخوردار است. هنوز گزارشی از شناسایی و جداسازی گونه‌های درگیر از عفونت پلوروپنومونی در ایران بدست نیامده است. عدم برخورداری از خصوصیت پاتوگونومیك در نمونه‌های بالینی و دشواریهای فراوان جداسازی میكروارگانیسم، به ضرورت شناسایی و بكارگیری روشهای تشخیصی جایگزین افزوده است.
علاوه بر این، دستیابی به روشی كاربردی و سریع، در تشخیص عفونتهای تنفسی گله‌ها و تخمینی از وضعیت عفونت در ایران، مدنظر این تحقیق بوده است.
در این مطالعه، 100 نمونه ریه با ضایعات مشكوك به عفونتهای تنفسی مایكوپلاسمایی از 100 گله مشكوك (50 گله گاو،30 گله گوسفند،20 گله بز) در اطراف كرمانشاه ، در سالهای 1386-1384 جمع آوری شدند. ضایعات ماکروسکوپی شامل کبدی شدن ریه‌ها با زخم‌های خاکستری و سفید(جامد شدن) و ظاهر منقوط با یا بدون فیبرین بودند. نمونه‌ها در محیط کشت PPLO براث و آگار کشت داده شدند. پس از پاساژهای متعدد،از 23 گله مشکوک،تک کلونی تخم‌مرغی شکل مایکوپلاسما جداشد(11 گله گاو،8 گله گوسفند،4 گله بز).
اما در واكنش, PCR63 گله عفونت مایكوپلاسمای تنفسی نشان دادند (37 گله گاو، 17 گله گوسفند، 9 گله بز).
این امر، مبین این نكته است كه علیرغم اینكه جداشدن عامل مایكوپلاسمایی از نمونه‌ها در محیط كشت، اساس تعیین وضعیت عفونتهای مایكوپلاسمایی قلمداد می‌شود، اما سخت‌رشد بودن گونه‌های مورد مطالعه در محیط كشت و عدم دستیابی سریع به نتیجه، كارآیی این روش تشخیصی را در پایش متداول عفونت گله‌ها زیر سوال برده است.
علاوه بر این، بكاربردن آنتی بیوتیكهای متنوع در دوره درمان و از بین رفتن میكروارگانیسم در خلال جمع آوری نمونه، نتایج رشد در محیط كشت مایكوپلاسما را دستخوش تغییر داده است.
از این رو، استفاده از روشهای مولكولی PCR بعنوان یك روش كاربردی، حساس و سریع توصیه می‌شود. پس از استخراج DNA نمونه‌ها به روش فنل کلروفورم و جدا كردن نمونه‌های آلوده به مایكوپلاسما از طریق PCR ، با استفاده از پرایمر اختصاصی كلاستر مایكوئیدس نمونه‌های مایكوپلاسمایی تحت واكنش PCR قرار گرفتند.
باند bp 548، تنها در نمونه كنترل ( سویه F38) دیده شد. به منظور كنترل روند واكنش، نمونه‌ها با پرایمر اختصاصی مایكوئیدس كلونی بزرگ و پرایمر اختصاصی آگالاكتیه، به طور جداگانه PCR شدند كه نتیجه این آزمایش، یافته‌های آزمایش قبلی را تائید می‌كرد.
اگر چه این تحقیق نشان داد كه عامل عفونتهای تنفسی مشكوك در نمونه‌های مورد مطالعه نمی‌تواند از گونه‌های كلاستر مایكوئیدس باشد، منتهی تخمین میزان عفونت در گله‌های مورد مطالعه، احتیاج به تحقیقات وسیعتر با جمع‌آوری تعداد نمونه‌های بیشتر در مطالعات بعدی دارد.
فصل اول:
كلـــیات
1- تاریخچه
عامل اصلی بیماری پلوروپنومونی واگیر گاوان[6] ـ كه امروزه به نام مایكوپلاسما مایكوئیدس مایكوئیدس بیوتایپ كلونی كوچك[7] شناخته می‌شود- در سال ١٨٩٨ برای اولین بار توسط نوكارد[8] وروكس[9] شناسایی گردید. در آن زمان، اولین نام نهاده شده بر این اجرام، پلوروپنومونی بود كه بعد از این كه اجرامی با خصوصیت مشابه این میكروارگانیسم از منابع دیگر به دست آمد، بنام اجرام شبه پلوروپنومونی نام‌گذاری شد. ٦٠ سال بعد، نواك نام مایكوپلاسما را به عنوان نام ژنریك اجرامی كه فاقد دیواره سلولیاند، پیشنهاد كرد (45).
٢- خصوصیات كلی مایكوپلاسما
مایكوپلاسماها، جزو كوچك‌ترین پروكاریوت‌هایند (μm١٥-٠) كه قادرند از فیلترهای مخصوص باكتری (μm٤٥-٢٢/٠) عبور كنند. این اجرام به دلیل فقدان دیواره سلولی، اشكال پلی‌مورفیك دارند و به اشكال كروی (μm٣/٠-٩/٠)، رشته‌ای (تا μm١)،گلابی شكل، شاخه‌ای و مارپیچی در زیر میكروسكوپ الكترونی دیده می‌شوند. در واقع، بیشتر شبیه به فرم L باكتری‌ها می باشند.ارگانیسم از سه ارگانل شامل غشا سلولی، ریبوزوم و مولكول حلقوی DNA تشكیل شده است. تصویر مایكوپلاسما در زیر میكروسكوپ الكترونی، شبیه فیلامان (بطری) است كه از دو انتها طویل شده است. این اندامك‌‌های انتهایی[10]، محل اتصال به غشا یوكاریوت است كه دارای یك ساختمان مركزی میله مانند[11] می‌باشد و توسط غشا احاطه شده است (70).
مجموعه خصوصیاتی مانند عبور از صافی‌های مخصوص پالایش باكتری، عدم حساسیت به آنتی‌بیوتیك‌ها و دشواریهای رشد، آنها را شبیه به ویروس‌ها كرده است. ولی وجود محتوای ژنتیكی DNA (٧-٥/١)% و RNA (١٧-٨)% كه توسط غشای پلاسمایی سه لایه‌ای حفاظت شده است، سبب تمایز آنها از ویروس‌ها، كلامیدیا وریكتزیاها می‌شود. به دلیل دارا بودن حداقل ژن‌های لازم برای تكثیر مستقل- كه در حدود تا محتوای ژنتیكی E.coli است ـ نیازمند موجودات زنده برای تكثیر و زنده‌مانی نمی‌باشند (50).
ولی به هر حال تعداد كم ژن‌ها، منجر به رشد بطئی، ونیاز قابل توجه به میزبان برای تامین برخی از مواد مغذی و بقا شده است. به همین علت بسیاری از مایکوپلاسماها به عنوان انگل‌های سطحی در غشا مخاطی دستگاه تنفس چشم، ادراری تناسلی، بافت پستانی و مفاصل شناخته شده اند و به ندرت بافت‌ها را مورد تهاجم قرار می‌دهند (47).
البته انتشار آنها به اندام‌های مختلف بیانگر وجود حداقل یك عفونت گذراست. به طور كلی، تنها برخی گونه‌های مایكوپلاسما و احتمالاً سویه‌های خاص، تمایل بیشتری به بعضی بافت‌ها یا اندام‌ها دارند، هر چند كه این تمایل به معنای حذف كامل تمایل به سایر بافت‌ها نمی‌باشد. اغلب مایكوپلاسماها، به عنوان آلوده كننده محیط كشت سلولی شناخته می‌شوند که تشخیص و کنترل آلودگی آنها مشكل است (50).
مایكوپلاسماها با استفاده از توانایی حركت خود كه به صورت سرخوردن است[12]، خود را به سلول‌های هدف می‌رسانند. این حركت كند بوده و تحت تاثیر آنتی‌بادی‌های اختصاصی مهار می‌شود (74).
بسیاری از مایكوپلاسماها، بی‌هوازی اختیاری بوده و بعضی به صورت مطلوب در اتمسفری با ١٠ -٥% CO2 رشد می‌كنند. مایكوپلاسماهای بی‌هوازی غیرپاتوژن در شكمبه گوسفند و گاو یافت می‌شود (2).
3-مقاومت مایكوپلاسماها
این اجرام توانایی تولید دیواره سلولی پلی‌مورفیك و پپتیدوگلیكانی را دارند و از همین رو، به آنها باكتری‌هایی با نقص دیواره سلولی[13] اطلاق می‌شود. آنتی‌بیوتیك‌هایی كه بر روی دیواره سلولی اثر می‌كنند،(دسته بتالاکتامز) مانند پنی‌سیلین و سفالوسپورین، آنها را از بین نمی‌برند. اگر چه نسبت به آنتی‌بیوتیك‌هایی كه بر روی سنتز پروتئین اثر دارند (مانند تتراسایكلین) حساسند، ولی این آنتی‌بیوتیك‌ها در بدن حیوانات زنده زیاد موثر نیستند، زیرا گاهی غلظت كافی آنها به سطح اپی‌تلیومی كه توسط مایكوپلاسماها احاطه شده است، نمی‌رسد. از خصوصیت مقاوم بودن به پنی‌سیلین و استات تالیم، برای جلوگیری از رشد میكروب‌های آلوده كننده محیط كشت استفاده می‌شود (72).
در آزمایش‌های تجربی، مایكوپلاسماها به شوك اسموتیك، ضدعفونی كننده‌های محیطی، الكل، گرما و خشكی، آنتی‌بادی‌های اختصاصی وکامپلمان حساس می‌باشند. دمای °C٥٥ به مدت '١٥ و °C٦٠ به مدت '٥ آنها را از بین می‌برد. برای مثال گونه مایكوئیدس مایكوئیدس در خارج از بدن حیوان بیش از چند ساعت، قادر به ادامه حیات نمی‌باشد، ولی در محل عفونت تا مدت‌ها باقی می‌ماند. از گاوهایی كه در ١٠ ماه پیش به بیماری پلوروپنومونی واگیر مبتلا بوده‌اند، میكروارگانیسم جدا شده است (72). سكوستراهای ریوی منبع بالقوه‌ای از آلودگی هستندو ارگانیسم را برای زمانی به مدت ٣ سال نگهداری می‌كنند. به همین علت، كانون‌های عفونت در اكثر موارد، حیوانات بهبود یافته‌اند. تركیبات دیگر از قبیل جفت و ادرار نیز می‌توانند ارگانیسم‌ها را برای مدت طولانی زنده نگه‌دارند. گزارش شده است كه یونجه آلوده به میكروارگانیسم تا مدت ١٢٤ ساعت، قادر به انتقال آلودگی است. هم‌چنین در ریه منجمد تا چندین ماه و در محیط كشت خشك شده در خلا، چندین سال زنده می‌ماند. فنل ١%، فرمالین ٥/٠% و كلرید جیوه ١% به مدت چند دقیقه میكروارگانیسم را از بین می‌برند (44).
بیماریزایی