گزارش كارآموزی بررسی آزمایشگاه داروسازی در 92 صفحه ورد قابل ویرایش
روش اندازه گیری مفنامیك اسید در كپسول 250 میلی گرم (تیتریسمتری) تعداد 20 عدد كپسول را خالی كرده و پودر داخل آن را كاملا مخلوط می كنیم تا به طور یكنواخت گردد از این پودر مقدار 0.5 گرم مفنامیك اسید (0.6 گرم) را دقیقا وزن كرده و در 100 میلی لیتر اتانول گرم (كه قبلا نسبت به محلول فنول رد خنثی شده باشد) حل كنید.
محلول حاصل را در مقابل اندی كاتور محلول فنول دو با محلول NaoH 0.1 مولار تیتر نمایید هر میلی لیتر از محلول NaoH 0.1 مولار معرفی معادل با 24.13 میلی گرم از مفنامیك اسید میباشد مقدار میلی گرم مفنامیك اسید موجود درهر كپسول از فرمول زیر محاسبه میشود.
میلی گرم مفنامیك اسید موجود هر در كپسول=* 24.13 كه درآن تا حجم معرفی از محلول NaoH 0.1 مولار برحسب میلی لیتر میباشد Limits:(237.5 to 262.5)
Ref: B.P ((1996), p:1793
شماره پنج 0.09
وزن پودر و كاغذ صافی 0.4022 gr
وزن كاغذ صافی - 0.0014 gr
وزن واقعی پودر
در 100 cc الكل 2 الی 3 قطره اندی كاتور می ریزیم رنگ از رنگ زرد به قرمز پوست پیازی تبدیل میشود سه قطره سود NaoH 0.1 مولار ریختیم رنگش دوباره زرد شد كه این كار به معنی خنثی شدن است سپس با ریختن 0.6 گرم پودر مفنامیك اسید داخل الكل بعد از مگنت استفاده كردیم كه پودر كاملا در الكل حل شود و 20 دقیقه برای حل شدن به آن زمان می دهیم.
فنل زرد: Hand book of chewistry and Physics (CRC)
رنگ از زرد به قرمز پوست پیازی
فرمول مفنامیك اسید 105% تا 95 C15H15NO2
دلیل استفاده از اندی كاتور: تغییر رنگ در یك PH خاص تغییر رنگ از حالتی به حالتی دیگر
چه از سود استفاده می كنیم كه چون واكنش اسید و باز برای خنثی كردن همدیگر
عمل تتراسیون:
در بورت NOH-1 0.1 مولار در ارلن الكل + پودر+ فنل دو:
20.9= V مصرفی ازبورت
فرمول گسترده: عدد جرمی 241.29
انواع اسم های تحاری: ponstan و ponstel
حلالیت كم در آب در الكل حلالیت زیادی دارد.
در هیدروكسیدهای قلیایی حلال است نوشته شده از كتاب MERCK INDEX
بدست آوردن عدد 24.13 یا 24.129
Disnlotion انحلال:
زمان انحلال:
در محلول با حجم معین زمان مشخص غلظت خاصی را در دور مشخص (همزن) كپسول شروع به حل شدن میكند و غلظت را اندازه می گیریم بر حسب درصد
زمان باز شدن Disantegration آب روی صفحه 39 ، 750cc آب مقطر می ریزیم.
آزمایش بعد:
می خواهیم زمان باز شدن كپسول مفنامیك اسید را در بدن انسان اندازه گیری كنیم.
دستگاه Disantegration دما را به اندازه دمای بدن انسان 38 تنظیم می كنیم تا هنگام باز شدن كپسول ها در آب و عبور آنها از توری بعد از 30 دقیقه از صافی عبور كرده و باز شد
آزمایش قبلی را با بچ 10 انجام می دهیم.
محاسبات:
دستگاه Disantegration:
كپسول های مفنامیك اسید با بچ 10
برای باز شدن كپسول time= 15 min
روش تعیین مقدار لیتیم كربنات در قرص لیتیم كربنات
تعداد 20 عدد قرص را وزن كرده و كاملا پودر كنید از این پودر مقداری معادل با 1 gr لیتیم كربنات دقیقا توزین كنید (1.367 gr) و در 100 میلی لیتر آب مقطر ریخته و به این مقدار 50 میلی لیتر محلول هیدرولیك Hcl اسید 1 مولار US افزوده و به مدت 1 دقیقه min بجوشانید و سپس سردكرده و قمدار اضافی اسید را در مقابل معرف متیل اورانژ با محلول سدیم هیدروكساید 1 مولار (V.S) تیتر كنید هر میلی لیتر از محلول هیدروكلریك اسید Hcl 1 مولار معادل 36.95 میلی گرم از Li2 Co3 میباشد.
مقدار میلی گرم Li2 Co3 در هر قرص از فرمول زیر محاسبه میشود.
كه در آن Wa وزن متوسط قرص ها برحسب میلی گرم (410) WS مقدار بر داشتی برحسب میلی گرم (1365)
V حجم مصرفی سدیم هیدروكساید 1 مولار بر حسب ml
به طور ساده
وزن 20 عدد قرص+ كاغذ: 8.1475
وزن كاغذ: 5.2365-
3.9555= 7.9110
دلیل جوشاندن: خارج شدن Co2 موجود در محلول
اول محلول را می گذاریم تا به جوش بیاید بعد از جوش آمدن به مدت 1 دقیقه بجوشد تا Co2 محلول از آن خارج شود. طرز تهیه سدیم هیدروكساید 1 مولار NaoH در ظرفیت 1 نرمالیته با مولاریته برابر هستند.
1نرمال= 1مولار
M:Na=40
40 گرم سود وزن كردیم در lit 1 آب حل كردیم و روی هم زن قرار دادیم تا حل شود. این واكنش گرمازاست اگر آب را به مقدار 1 Lit كم كم به سود بیفزاییم باعث میشود كه از گرمای خود سود استفاده شود تا در آب بهتر حل شود.
در بورت اسید Hcl
در ارلن سود N 0.1 نرمال و تیتراسیون را شروع می كنیم بهترین معرف برای تیتراسیون اسید و باز فنل فتالئین است كه 2.2 اسید Hcl مصرف شد رنگ سود سفید شد
از این راه نرمالیته سود رابدست آوردیم.
آزمایش مجدد
روش تعیین مقدارلیتیم كربنات در قرص لیتیم كربنات
10 عدد قرص لیتیم كربنات را پودر كردیم و 1.36 gr وزن نمودیم سپس در100 ml آب و 50 cc محلول هیدروكلردریك 1.05Hcl نرمال حل نمودیم و آنرا به مدت 1 min جوشاندیم سپس در ظرف آب یخ قرار دادیم و تا خنك شود بعد با محلول سود NaoH كردیم ضمنا معرف ما متیل اوران= میباشد با مصرف 25.3 cc محلول ما از رنگ صورتی به زرد تبدیل شد.
تمامی اعداد بر واحد mg میلی گرم میباشد.
برای تبدیل از gr به mg در عدد 1000 ضرب می كنیم:
Dissolutio قرص لیتیم كربنات
محیط: 900 میلی لیتر آب مقطر
دور در دقیقه: 100 rpm
زمان: 30 دقیقه
طرز تهیه محلول استاندارد:
تعداد 30 میلی گرم از لیتیم كربنات استاندارد را دقیقا توزین كرده و به بالن ژوژه 100 میلی لیتری منتقل كرده سپس مقدار 20 میلی لیتر آب مقطر و مقدار 0.5 میلی لیتر هیدروكلرییك اسید غلیظ به آن افزوده خوب به خم بزنید تا كاملا حل شود و با آب مقطر به حجم برسانید و مخلوط نمایید.
مقدار 20 میلی لیتر از این محلول را به بالن ژوژه یك لیتری (1000 میلی لیتر) منتقل كنید. به آن تعداد 800 میلی لیتر آب مقطر و مقدار 20 میلی لیتری از محلول surfactant مناسب افزوده با آب مقطر به حجم برسانید و مخلوط كنید.
طرز تهیه محلول آزمایشی:
محلول تحت آزمایش قرص لیتیم كربنات را به بالن ژوژه یك لیتری منتقل كنید و با آب مقطر به حجم برسانید وخوب مخلوط كنید. مقدار 20 میلی لیتر از محلول صاف شده را به بالان ژوژه یك لیتری دیگری منتقل كرده و به آن مقدار 500 میلی لیتر آب مقطر و یك قطره محلول هیدروكلریك اسید غلیظ و مقدار 20 میلی لیتر از محلول sufractant مناسب افزوده و با آب مقطر به حجم برسانید و مخلوط نمایید.
روش كار:
از دستگاه flam photometero مناسب استفاده می كنیم. صفر و ضد دستگاه را تنظیم می كنیم سپس میزان نشر محلول استاندارد و محلول نمونه را در طول موج uvi nm اندازه گیری كنید.
مقدار میلی گرم Li2 Co3 در هر قرص از فرمول زیر محاسبه كنید
100 C (A/S)
كه در آن A و S به ترتیب اعداد خوانده شده از دستگاه برای محلول های نمونه و استاندارد می باشند و C غلظت نهایی استاندارد بر حسب میكروگرم بر میلی لیتر میباشد. تلورانس نباید از 80% Li2Co3 تعداد مقدار نوشته شده بر روی اتیكت در مدت 30 دقیقه كمتر باشد. .
اقتباس از: U.S.P.XXIV,P.982(2000)
این قرص برای اختلاف روانی و … مورد استفاده میباشد.
تكرار ازمایش برای بار سوم:
روش تعیین مقدار لیتیم كربنات در قرص لیتیم كربنات:
از پودر قرص های لیتیم كربنات به مقدار 1.362 gr وزن می كنیم وزن كاغذ صافی 0.1477 میباشد پودر قرص را در 100 ml آب مقطر و 50 cc اسید كلریك Hcl تیتر ازول Titeisol حل می كنیم سپس به مدت 1 دقیقه می جوشانیم و در ظرف سرد قرار می دهیم تا سرد شود بعد با سود NaoH 1 نرمال تیتر می كنیم معرف ما متیل اورانژ میباشد. تغییر رنگ از صورتی به زرد تبدیل شد. V=23.2cc حجم مصرفی
روش اندازه گیری اكسی متولون در قرص:
معرف لازم:
1- محلول اتانولی سدیم هیدروكساید (Ethanolic sodium hydroxide 0.01m)(0.0m) (420 میلی گرم از سدیم هیدروكساید را در اتانول 96% حل و با آن به حجم 100 میلی لیتر برسانید)
وسیله های مورد لزوم:
1- هاون چینی 2- ترازوی حساس 3- بالن ژوژه 250 میلی لیتری و 50 میلی لیتری 4-پلی پت ژوژه 5 میلی لیتری 5- دستگاه اسپكتروسكپی uv/vis باسلهای مناسب
روش كار:
تعداد 20 عدد قرص اكسی متولون را در هاون كاملا پودر كرده و از این پودر مقداری معادل با 25 میلی گرم اكسی متولون را برداشته (239.5 میلی گرم) و به بالن ژوژه 250 میلی لیتری منتقل كنید و در محلول اتانولی سدیم هیدروكساید (0.01m) حل و به حجم برسانیدو در صورت لزوم صاف نمایید. 15 میلی لیتر اول از محلول صاف شده را دور بریزید و از بقیه مقدار 5 میلی لیتر را به بالن ژوژه 50 میلی لیتری منتقل و با محلول اتانولی هیدروكساید (0.01m) رقیق و به حجم برسانید. خوب مخلوط كرده و جذب محلول حاصل را در طول موج 315 nm و با دستگاه اسپكتروسكپی مناسب در سل یك سانتی متری در مقابل بانك محلول اتانولی سدیم هیدروكساید (0.01m) اندازه گیری كنید.
میلی گرم اكسی متولون در هر قرص از فرمول زیر محاسبه میشود.
كه در آن:
s= مقدار برداشتی از نمونه برحسب میلی گرم (239.5mg)
w= وزن متوسط قرص ها بر حسب میلی گرم میباشد. (479mg)
547= 1% A برای اكسید متولون در طول موج 315nm میباشد.
Ref: BP.(1998). P:1848
Limits: (45 to 55 mg/tab)
Dissolution برای قرص اكسی متالون
دستگاه و مواد لازم: Apparatus I: 100 rpm
مواد:
1- محلول پربوریك اسید و پتاسیم كلراید (0.2 مول):
مقدار 12.37 گرم از بوریك اسید (H3Bo3) خشك شده در رده ای 120 تا 110 درجه سانتی گراد به مدت یكساعت و مقدار 14.91 گرم از پتاسیم كلراید (KCL) را در آب مقطر حل كنید و با آب مقطر به حجم 1000 میلی لیتر برسانید.
2- محلول NaoH (0.2 مول):
این محلول را از محلول سدیم هیدروكساید نرمال كه روش تهیه و استاندارد كردن آن را در صفحه ضمیمه توضیح داده شده است تهیه و دوباره استاندارد كنید.
معرفها
محلول هیدروكلریك اسید نرمال استاندارد شده
محلول سدیم هیدروكساید 0.5 نرمال استاندارد شده
روش عمل (كلیه كارها در دمای انجام خواهد گرفت)
10 قرص را وزن كرده بدون هدر دادن به پودر تبدیل كنید و دقیقا مقداری برابر با وزن یك قرص به بشر 150 میلی لیتر كنید. دقیقا 50 میلی لیتر آب مقطربه آن اضافه كرده به مدت یك دقیقه بهم بزنید. (با بهمزدن مغناطیسی) سپس مقدار 30 میلی لیتر محلول هیدروكلریك اسید نرمال (V.S) به آن اضافه كنید و دقیقا مدت 10 دقیقه بهم بزنید (با بهمزدن مغناطیسی) بهم زدن راخاموش كرده و بلافاصله با استفاده از سوزن ضعفهای خاص بشر را خارج كنید و سوزن را با 20 میلی لیتر آب مقطر بداخل بشر شستشو دهید و دوباره به مدت دقیقا 5 دقیقه بهم زن را روشن كنید و سپس بلافاصله مقدار اضافی هیدروكلریك اسید رابا محلول سدیم هیدروكساید 0.5 نرمال تیتر نمایید تا اینكه محلول مخلوط در 3.5Ph= مدت 10 تا 15 ثانیه یا بیشترباشد. مقدار عدد Meq اسید مصرفی را برای هر قرص محاسبه كنید.
U.S.P, XX III (1995) P.1732
زمان نشت كف:
ماكزیمم 180 ثانیه برای هر قرص
اساس روش:
یك مقدار معینی از نمونه كه دارای ساپمتیكون است به محلول كف كننده اسیدی شده تربتون 100 (Acidified foaming solution 1%) در 37 درجه سانتیگراد اضافه میشود و در تحت شرایط مخصوص و به مدت معین تكان داده میشود. سپس زمانی كه لازم است تا كف نشت بكند اندازه گیری میشود و بدین طریق نمونه مورد آزمایش اندازه گیری میشود.
طرز تهیه محلول كف كننده:
یك محلول یك درصد وزنی به حجمی تریتون در آب مقطر شرح زیر تهیه كنید:
10 گرم تریتون 100 را به یك بالن ژوژه میلی لیتری 100 كه محتوی حدود 300 میلی لیتر آب مقطر میباشد اضافه كنید به آرامی تكان بدهید تا حل شود. 1.3 میلی لیتر Hcl غلیظ و 5 میلی گرم رنگ آبی شماره FO &cl ، Blue 1 به آن اضافه كنید و به آرامی تكان بدهید. تا حل شود با آب مقطر به حجم برسانید.
روش عمل:
با یك فرور 100 میلی لیتری از محلول كف كننده را به یك سیلنیر 250 میلی لیتری منتقل كنید در سیلندر را گذاشته و در حمام 37 درجه به مدت 20 دقیقه قرار دهید. سیلندر از حمام 37 درجه در آورده به یك جانشین مشابه متصل كنید یك قرص را كه قبلا در هاون پودر كرده این تماما به سیلندر اضافه كنید سر سیلندر را گذاشته عدد shakel را روی 10 تنظیم كنید و سپس به مدت 10 ثانیه تكان بدهید، سپس زمان نشت كف را با كرنومتر اندازه بگیرید. شروع آزمایش (بكار انداختن كرونومتر) بعد از 10 3ثانیه تكان دادن و در پایان آن موقعی است (متوقف كردذن كرونومتر) كه سطح بدون كف مایع دیده شود.
مفنامیك اسید
وزن پودر قرص: 0.6023 Bach: 16
محاسبه:
قرص دیفن هیدرامین
روش اندازه گیری دیفن هیدرامین هیدروكلراید
دیفن هیدرامین
طرز تیهه محلول استاندارد
مقدار 40 میلی گرم ازدیفن هیدرامین هیدروكلریك استاندارد را دقیقا توزیع و آنرا در اسید سولفوریك 0.1 نرمال حل و به حجم 100 میلی لیتر برسانید.
طرز تهیه محلول نمونه:
تعداد 20 عدد قرص را پودر كرده و مقدار 162 میلی گرم از آن را كه معادل با 40 میلی گرم از دیفن هیدرامین هیدروكلراید دقیقا توزین و به داخل كانتور 125 میلی لیتری ریخته 20 میلی لیتر آب مقطر و 2 قطره محلول سولفوریك اسید غلیظ و به آن افزوده و با 20 میلیلیتر اترا استخراج كنید (دقیقه) فاز اتری را به داخل دكانتور 125 میلی لیتری ریخته فاز اتری را با 10 میلی لیتری محلول سولفوریك اسید 0.1 نرمال به مدت دقیقه استخراج نماید و فاز اسیدی را به دكانتور اولی اضافه كنید و خوب تكان دهید و با محلول سدیم هیدروكساید نرمال (نیم میلی لیتری) و قطره قطره اضافه كنید تا نسبت به كاغذ PH قلیایی شود سپس 3 بار هر بار 20 میلی لیتر اتر استخراج كنید (4 دقیقه) و فاز اتری جمع آوری شده را 3 بار هر بار با 25 میلی لیتر محلول سولفوریك اسید 0.1 نرمال استخراج كنید(4 دقیقه) واستخراج شده ها را بالن ژوژه 100 میلی لیتری ریخته و با محلول سولفوریك اسید 0.1 نرمال به حجم برسانید.
روش كار جذب محلول استاندارد و محلول آزمایشی را در طول موج 258 nm با دستگاه اسپكیروسكپی مناسب در سل یك سانتی متری اندازه گیری كنید.
محاسبه:
مقدار میلی گرم دیفن هیدرامین هیدروكلراید در هر قرص از فرمول زیر محاسبه میشود.
(وزن متوسط یك قرص)
بطور ساده:
كه درآن:
جذب محلول فوفه در Au= 258 nm و جذب محلول استاندارد در As=258
قرص دیفن هیدرامین
طول موج nm 258
استاندارد: (اسید سولفوریك 0.1 N) دستگاه را صفر می كنیم با هر چیزی (ماده یا محلول) كه به حجم می رسانیم با همان دستگاه اسپكتروفتومتر را صفر می كنیم و بعد طول موج محلول را می خوانیم
جذب محلول نمونه در 258 nm Au= 405
جذب محلول استاندارد در 258 nm As= 602
روش اندازه گیری ویتامین های E.D.A در شربت مولتی ویتامین بطریقه HPLG
تهیه محلول آزمایشی:
5 میلی لیتری از شربت رابه یك قیف دكانتور منتقل كرده و به آن 15 میلی لیتر آب مقطر افزوده و 5 بار هر بار با 40 میلی لیتر كلروفرم استخراج كنید كلروفرم های جمع آوری شده را از قیف پنبه دار و از روی سدیم سولفات ایندو صاف نمایید و بوسیله خلاء “Rotavapor” تا مرحله نزدیك خشك (در دمای زیر 50 درجه سانتیگراد) تغییر نمائید سپس باقیمانده را به كمك مقدار كمی كلروفرم به بالن ژوژه 10 میلی لیتری منتقل كرده و به حجم برسانید. مقدار 10 میكرولیتر از آن را به دستگاه تزریق نمایید.
تهیه محلول استاندارد ویتامین E استات ویتامین D و ویتامین A پالمیتات:
الف) مقدار 1 گرم از ویتامین D مایع استاندارد را دقیقا توزین كرده و در 25 میلی لیتر كلروفرم حل وبه بالن ژوژه 50 میلی لیتری منتقل كرده وبا كلروفرم به حجم برسانید (دقت اول ویتامین D).
ب) مقدار 250 میلی گرم از ویتامین A پالمیتات (1.000.000 واحد) منتقل كنید. و با كلروفرم به حجم برسانید. (دقت اول ویتامین A)
ج) مقدار 150 میلی گرم از ویتامین E استات استاندارد را دقیقا توزین كرده وبه بالن ژوژه 100 میلی لیتری منتقل كرده و در كلروفرم حل كنید و به آن مقدار 10 میلی لیتر از محلول رقت ویتامین A و 0.2 میلی لیتر از محلول رقت اول ویتامین D را افزوده با كلروفرم به حجم برسانید از این محلول مقدار 10 میكرولیتر به دستگاه تزریق نمایید.
روش كار اندازه گیری ویتامین D، A و E:
دستگاه مورد استفاده LC Module L Water كه مجهز به ستون (3.6 300 mm Bondapak CL8) و فاز متحرك متانول (98%) و مواد مورد استفاده متانول ، با شماره 6007 آب مقطر دوبار تقطیر شده كه بعد از مخلوط شدن از فیلتر 0.22 UM MILLIPORE صاف شده باشد (رتكتور uv 486 طول موج aufs= 2.328 برای ویتامین A طول موج aufs= 0.1, 284 برای ویتامین E) طول موج aufs= 0.03, 265 برای ویتامین D و همچنین ماگزیمم فشار برابر با 3000 خواهد بود FLOW Rate= 2 ml/min
از محلول نمونه و محلول استاندارد از هر كدام بعد از فیلتر Millex- Hr 0.45 به مقدار 10 میكرولیتر به طور اتوماتیك تزریق انجام میگیرد زمان مورد نیاز برای و تزریق برابر با 10 دقیقه میباشد. محاسبات بوسیله دستگاه نرم افزار NEC power Mate 386.331 انجام گرفته است.
توجه شود تمام مراحل كار تا انجا كه ممكن است در تاریكی انجام گیرد و از تماس با مواد اكسید كننده محافظت گردد.
روش اندازه گیری پیریدوكسین هایدروكلراید در قطره مولتی ویتامین:
اساس كار براندازه گیری جذب نوری در طول موج مرئی بوسیله اندوفنل كه از اتصال پریدوكسین به 2،6- دی كلروكئیون كلریمید در یك بافر قلیائی بدست میآید استوار است.
معرفهای لازم:
1- محلول كلریمید:
100 میلی گرم 2و 6- دی كلرویمنون (N-2.6- Trichloro-p_beuzoquiuine) را در 250 میلی لیتر ایزوپروپانول (2- پروپانول) حل كنید. این محلول باید در یخچال نگهداری شودو به مدت یك ماه قابل استفاده است و چنانچه رنگ محلول صورتی شده باشد نباید مصرف شود
2- محلول آمونیا آمونیوم كلراید (بافر):
160 میلی گرم آمونیوم كلراید را در 700 میلی لیتر آب مقطر حل كرده و به آن 160 میلی لیتر محلول آمونیوم هایدروكساید اضافه كرده و مخلوط نمایید. سپس با آب مقطر به حجم یك لیتر برسانید و خوب مخلوط نمایید. در باین محلول باید همیشه كاملا بسته و محكم باشد تا غلظت آمونیاك آن تغییر نكند.
3- محلول بوریك اسید:
5 گرم بوریك اسید را در 100 میلی لیتر آب مقطر حل كنید.
تهیه محلول استاندارد
دقیقا مقدار 100 میلی گرم پیرپدوكسین ها هیدروكلراید رفرانس استاندارد را كه قبلا در ویسكلوز روی فسفریك نپتواكساید P2O5 به مدت 4 ساعت خشك شده را توزین كرده و در یك بالن ژوژه 1000 میلی لیتری ریخته و در هیدروكلریك اسید 0.1 نرمال حل كرده و به جسم برسانید این محلول بایستی درشیشه های قهوه ای و در یخچال نگهداری شود. (تا مدت 3 ماه پایدار بوده و می توانند مورد استفاده قرار گیرد)
5 میلی لیتر ازاین محلول را داخل بالن ژوژه 50 میلی لیتری كرده را با آب مقطر به حجم رسانده و خوب مخلوط نمایید این محلول دارای 0.01 میلی گرم پپرید وكسین هایدروكلراید در هر میلی لیتر میباشد. (این محلول باید تازه تهیه شود ولی در صورت نگهداری آن درجای خشك و در ظروف با درب بسته و محكم میتوان به طور روزانه تهیه نمود)
50 میلی لیتر از این محلول را به یك ارلن مایر كه حاوی 25 میلی لیتر ایزوپروپانول میباشد منتقل كرده و مخلوط كنید.
تهیه محلول آزمایشی:
5 میلی لیتر از نمونه مورد آزمایش را در یك بالن ژوژه 50 میلی لیتری منتقل كرده و با آب مقطر به جسم برسانید. 5 میلی لیتر از این محلول را در یك بالن ژوژه 20 میلی لیتری منتقل كرده و 200 میلی گرم NaNo3 به آن بیافزایید. افزوده و با محلول سدیم هایدروكساید 0.1 نرمال به حجم برسانید. 5 میلی لیتر از این محلول را به یك سیلندر كه محتوی 25 میلی لیتر الكل ایزوپروپانول است منتقل كنید و خوب تكان دهید.
روش عمل:
چهار لوله آزمایش بزرگ انتخاب كرده و از یك تا چهار شماره گذاری كنید. در دو لوله اول و دوم در هر كدام 5 میلی لیتر از (ایزوپروپانول محلول استاندارد) و در هر چهار لوله آزمایش یك میلی لیتر محلول سدیم استات (یك در پنج) و یك میلی لیتر محلول بافر آمونیاك آمونیوم كلراید افزوده و در لوله دوم و چهارم یك میلی لیترلب از هر افزایش لوله ها را خوب تكان داده و لوله های آزمایش را تا دمای خنك كرده به لوله اول 1 میلی لیتر محلول كلرید افزوده و تكان دهید و بعد از 60 ثانیه جذب این محلول را در طول 650 نانومتر با یك دستگاه اسپكتروفتومتر منابس اندازه گیری كنید(Au).